| 초록 |
본 발명은 동종반응성(allo-reactive) T 세포의 유세포 검출을 이용하여 공여체와 수용체 사이의 호환성을 결정하는 방법에 관한 것으로서, 하기 단계를 포함한다: a) 분석대상인 공여체/수용체 쌍으로부터 획득된 혈액 샘플은 라벨링된 샘플로 명명되고 여기에 수용체의 샘플을 구별하는데 적합한 마커를 첨가하는 단계, 이때 분석대상인 공여체/수용체 쌍으로부터 획득된 다른 혈액 샘플은 비-라벨링된 샘플로 명명됨, b) 두 샘플을 제1배지로 1회 이상 희석하고, 액상으로부터 샘플의 세포 성분을 분리하는 단계, c) 제2배지에서 라벨링된 샘플의 혈액 샘플 잔여물과 비-라벨링된 샘플의 혈액 샘플 잔여물을, 특히 동일한 부피로, 세포 성분을 각각 분리하여 재흡수(separated reuptake)하는 단계, d) 비-라벨링된 샘플과 라벨링된 샘플을, 특히 혼합물의 보존하에 대략 1:1의 비로, 혼합하는 단계, e) 항-CD28 항체 또는 항-CD28 항체 및 항-CD49d 항체의 첨가에 의해, 상기 단계 d)에 따른 라벨링된 샘플 및 비-라벨링된 샘플의 혼합물에서 항원 표출 세포(APC: antigen presenting cell)를 자극하는 단계, f) 선택적으로 보호 가스 분위기, CO 2 분위기 하에서, 35℃ 내지 39℃, 바람직하게는 37℃의 온도에서, 1.5시간 내지 2.5시간, 바람직하게는 2시간 동안 혼합물을 일차 인큐베이션하는 단계, g) 분비 억제제를 첨가하는 단계, h) 상기 단계 d)의 샘플을 혼합하는 단계, i) 선택적으로 보호 가스 분위기, CO 2 분위기 하에서, 35℃ 내지 39℃, 바람직하게는 37℃의 온도에서 적어도 2.5시간 동안 이차 인큐베이션하는 단계, j) 필요한 경우, 적혈구를 용균시키는 단계, k) 마킹에 의해 림프구의 유세포 검출, 및 예를 들어 라벨링된 항-CD4 및/또는 항-CD8 항체에 의해 CD4 또는 CD8 림프구의 유세포 검출 단계, l) 세포내 시토킨으로 활성화된 림프구, 활성화된 림프구 및 활성 마커를 발현하는 림프구의 유세포 검출 단계, m) 유세포 검출에서 하기 결과가 발생한다면, 라벨링된 샘플이 획득된 개체와 비-라벨링된 샘플이 획득된 개체 사이에서 동종반응성(alloreactivity)이 검출되는 것인 단계: a. 마킹 pos/CD4 pos/CD69 pos/INF감마 pos, b. 마킹 neg/CD4 pos/CD69 pos/INF감마 pos, c. 마킹 pos/CD8 pos/CD69 pos/INF감마 pos, d. 마킹 neg/CD8 pos/CD69 pos/INF감마 pos. |
