| 초록 |
본 발명은 하기 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 폴리뉴클레오티드 분석물질의 뉴클레오티드 염기 시퀀스를 결정하는 방법에 관한 것이다: (a) 작은 물방울 스트림을 생성하는 단계로, 상기 작은 물방울 스트림의 적어도 일부는 단일 뉴클레오티드를 포함하고, 상기 작은 물방울 스트림 내의 단일 뉴클레오티드의 순서는 상기 분석물질의 뉴클레오티드 시퀀스에 상응하며; (b) 각각의 작은 물방울 내로 복수 개의 생물학적 프로브 형태 각각의 형태를 도입하는 단계로, 각각의 형태는 (i) 탐지 불가능한 상태에 있는 상이한 탐지 가능한 성분을 포함하고, (ii) 상기 분석물질을 구성하는 상이한 상보적인 단일 뉴클레오티드를 포획하는 데 적합하며; (c) 상기 작은 물방울 내에 포함된 단일 뉴클레오티드를 그의 상보적인 프로브에 결합시켜 사용 프로브를 생성하는 단계; 및 (d) 상기 탐지 가능한 성분이 탐지 가능한 상태에 있는 상기 사용 프로브로부터 유리되도록 하는 단계. 전형적으로, 사용되는 상기 생물학적 프로브는 단일 가닥 뉴클레오티드 부분 을 포함하고, 상기 단일 가닥 뉴클레오티드 부분의 말단은 두 개의 상이한 이중 가닥 올리고 뉴클레오티드 부분에 부착되고, 상기 적어도 하나의 올리고 뉴클레오티드 부분은 특징적인 탐지특성을 갖는 탐지 가능한 성분을 포함하고, 상기 탐지 가능한 성분은 상기 올리고 뉴클레오티드 부분 상에 배열되어 상기 탐지 가능한 특성은 상기 프로브의 미사용 상태에서 실질적으로 탐지될 수 없는 것을 특징으로 한다. 가장 바람직한 구체예로, 상기 프로브는 복수 개의 형광단으로 표식되고 상기 단일 가닥 뉴클레오티드 부분에 상기 타겟 단일 뉴클레오티드를 결합함으로써 생성되는 제한효소 인식 부위를 더 포함한다. 적합하게, 상기 단계(c)는 중합효소 및 리가아제의 존재하에 수행될 수 있으며 상기 단계(d)는 제한효소 및 엑소뉴클레아제의 존재 하에서 수행될 수 있다. 전형적으로, 상기 작은 물방울의 유속은 초당 100 내지 2000개의 물방울이다. |
