| 초록 |
최근 암 줄기세포는 종양 조직의 형성 및 성장 그리고 전통적 화학요법들이 처음에는 종양을 축소시킬 수 있지만, 종양 전체를 근절하는 것에는 실패하여, 궁극적으로 재발한다는 결과를 설명하는 자연적 화학요법 내성에 책임 있는 것으로 평가되고 있다.암 줄기세포 가설에 따르면, CD133 양성 세포는 긴시간 종양 성장을 결정함에 따라서 임상 결과에 영향을 미치는 것으로 의심된다.최근 CD133 양성 세포의 부분 및 그들의 클러스터(clusters)안에 위상적 조직(topological organisation) 둘다에 종양 등급(grade)의 부정적인 진행-프리 생존(adverse progression-free survival) 및 전체의 독립적 생존, 절제술 범위 또는 환자의 연령이 중요한 예후 인자라는 사실을 발견하였다. CD133-양성 암 줄기세포의 검출 및 타겟팅을 위한 현재 병리학적 기술들은 종래의 항체 기반 시스템이 사용되지만, CD133 항체의 이용은 크기 및 조직 침투에 그것의 상대적 불능 때문에 민감도가 떨어진다. 따라서, CD133 + 세포에 앱타머의 생성은 암의 박멸에 유리할 것이다.이에 본 발명자는 빠른 내부화 및 우수한 종양 침투를 보이는 CD133에 특이적인 앱타머를 발견하여 현재의 문제점를 해결하고자 하였다. 본 발명은 특이적으로 CD133에 결합하는 분리된 RNA 앱타머를 제공한다. 일 예에서, CD133은 인간 CD133 이다. 일 예에서, 본 발명의 앱타머는 CD133이 발현된 HT-29 세포에서 82-145 nM 범위의 해리 상수를 가진다.또 다른 예에서, 본 발명의 앱타머는 CD133이 발현된 Hep3B 세포에서 32-52 nM 범위의 해리 상수를 나타낸다. 일 예에서, 분리된 RNA 앱타머는 공통적 서열 5'-CCCUCCUACAUAGGG-3'(서열목록 제1서열)을 포함한다. 또 다른 예에서, 분리된 RNA 앱타머는 다음으로부터 선택된 서열을 포함한다: (i) 5' -GAG ACA AGA AUA AAC GCU CAA CCC A CC CUC CUA CAU AGG G AG GAA CGA GUU ACU AUA GAG CUU CGA CAG GAG GCU CAC AAC- 3'(서열목록 제2서 열); (ii) 5' -GAG ACA AGA AUA AAC GCU CAA CCC A CC CUC CUA CAU AGG G AG GAA CGA GUU ACU AUA G-3'(서열목록 제3서열); (iii) 5' -GCU CAA CCC A CC CUC CUA CAU AGG G AG GAA CGA GU-3'(서열목 록 제4서열); (iv) 5' -CC A CC CUC CUA CAU AGG G UG G-3'(서열목록 제5서열); 및 (v) 5' - CC CUC CUA CAU AGG G -3'(서열목록 제1서열). 또 다른 예에서, 분리된 RNA 앱타머는 공통적 서열 5' -CAGAACGUAUACUAUUCUG- 3'(서열목록 제6서열)을 포함한다. 또 다른 예에서, 분리된 RNA 앱타머는 공통적 서열 5' -AGAACGUAUACUAUU- 3'(서열목록 제7서열)을 포함한다. 또 다른 예에서, 분리된 RNA 앱타머는 서열 5' -GAG ACA AGA AUA AAC GCU CAA GGA AAG CGC UUA UUG UUU GCU AUG UU A GAA CGU AUA CUA UU U CGA CAG GAG GCU CAC AAC AGG C-3'(서열목록 제8서열)을 포함한다. 특정 예에서, 본 발명은 2'-플루오로-피리미딘 변형 및 CD133에 특이적으로 결합하는 분리된 RNA 앱타머를 제공한다. 또 다른 예에서, 분리된 RNA 앱타머는 서열목록 제1서열 또는 서열목록 제6서열을 필수적으로 구성한다. 또 다른 예에서, 분리된 RNA 앱타머는 서열목록 제1서열 또는 서열목록 제6서열을 구성한다. 또 다른 예에서, 분리된 RNA 앱타머는 15 염기 내지 100 염기 서열 길이의 공통적 서열 CCCUCCUACAUAGGG(서열목록 제1서열), 또는 공통적 서열 CAGAACGUAUACUAUUCUG(서열목록 제6서열), 또는 공통적 서열 AGAACGUAUACUAUU(서열목록 제7서열)을 포함한다.또 다른 예에서, 15 내지 40 염기 길이. 또 다른 예에서, 19 염기 내지 100염기의 서열 길이. 추가 예에서, 길이는 19 내지 40 염기이다. 서열은 앱타머의 결합 루프을 유지하는 공통적 서열에 하나 이상의 아미노산 치환을 포함 할 수 있다.일 예에서 서열은 공� |
