| 초록 |
본 발명은 돼지유행성 설사병 바이러스 분리와 배양법, 저온 순화주와 혈청 내성주 제조법, 상기 바이러스의 외피 단백질의 추출방법 및 본 바이러스의 혈청 진단 방법에 관한 것으로서, 보다 상세하게는본 발명은 1) PEDV(돼지 유행성 설사병 바이러스) RNA가 검출 확인된 시료들을 어린 돼지에 경구 접종후 설사 발현 초기에 장 융모(intestinal villi)를 함유하는 소장 내벽의 장 유제액을 수확하는 단계; 2) 상기 장 유제액의 PEDV를 조직 배양액으로 Vero 세포에 감염시키는 단계; 3) 상기 Vero 세포를 트립신이 함유된 배양 배지에서 세포 단분자막(monolayers)으로 계대 배양하는 단계; 및 4) 상기 Vero 세포의 계대 배양에서 PEDV 특이성 세포 변성 효과 (Cytopathic effects; CPE)를 나타내는 균주를 확인하는 단계;를 포함하는 PEDV의 분리 및 배양 방법, 상기 방법으로 분리된 PEDV 분리주를 연속적으로 저온에서 계대배양하여 저온 순화된(low temperature adapted) PEDV 균주의 제조 방법, 1) 상기 방법으로 분리된 PEDV 분리주를 FCS(fetal calf serum)가 함유된 배지에서 Vero 세포에 감염시키는 단계; 2) 상기 Vero 세포를 FCS가 결여되고 저량의 트립신이 함유된 배지에서 바이러스를 증식 계대시키고, 최종적으로 트립신이 결여된 배지에서 PEDV가 증식할 수 있도록 상기 Vero 세포를 연속적으로 배양하는 단계; 및 3) 상기 Vero 세포를 점차 FCS 농도가 증가하는 혈청이 함유된 배지에서 배양함으로써 PEDV를 증식시키는 단계;를 포함하는 PED 바이러스 혈청 내성주 (PEDV rSerum)의 제조 방법, 1) 상기 방법으로 제조된 PED 바이러스 혈청 내성주 (PEDV rSerum)를 Vero 세포에 감염시키고 초기 세포 변성(cytopathic effects; CPE)시키는 단계; 및 2) 상기 세포 변성된 Vero 세포로부터 PED rSerum 바이러스의 외피 단백질을 추출하는 단계;를 포함하는 PED rSerum 바이러스의 외피 단백질의 추출방법, 및 1) 상기 방법으로 제조된 PED 바이러스 혈청 내성주 (PEDV rSerum)를 Vero 세포에 감염시키고, 상기 감염된 Vero 세포를 고정하는 단계; 2) 상기 고정된 Vero 세포를 시험하고자 하는 돼지 혈청으로 희석시키는 단계; 및 3) 상기 희석된 Vero 세포를 복제된 바이러스 역적정(back-titration), 형광색소 또는 효소가 결합된 항-돼지(anti-swine) IgG를 반응시켜 Vero 세포가 발색되도록 유도 및 ELISA와 방사성 면역 확산의 원리가 결합된 방사성 면역 확산 효소 분석법(RIDEA = radial immunodiffusion enzyme assay) 중에서 선택된 어느 한 방법에 의한 PED 바이러스 혈청 내성주를 이용한 PED 바이러스 감염된 돼지의 항체 측정 방법을 제공한다.본 발명에 의한 돼지 유행성 설사병 바이러스의 항체 측정 방법은 돼지 전염성 설사 질병의 원인체인 돼지 유행성 설사병 바이러스 항체와 면역학적으로 결합성이 있는 시료내의 돼지 유행성 설사병 바이러스 항원의 존재를 경제적이며 간편하게 진단할 수 있다. |
