| 초록 |
[목적] 과립구-대식세포 콜로니-자극 인자, 특히 사람의 GM-CSF를 정제하는 방법에 관한 것으로,높은 특이적 생물학적 활성, 높은 전기 영동적 순도 및 저수준의 파이로겐 또는 다른 오염물질을 갖지 않는 GM-CSF의 정제방법을 제공한다.[구성] 세포를, 85%인산으로 pH 4.5까지 가하고, 50%트리클로로아세트산을 pH 2.0까지 가함으로써사멸시킨다. 모든 현탁액 액체를 세포로부터 제거하여 버리고, 처리된 세포의 제2현탁액을 준비하고, 제2현탁액을 중화시키며, GM-CSF-함유 액체를 현탁된 세포로부터 0.2마이크로막을 통한 여과에 의해 분리한다. 그 후, 중화된 추출물을 수산화나트륨 또는 염산으로 pH 7.5까지 조절하고 중화된 추출물의 전도성은 탈이온수를 가하여 5 내지 10mS 까지 조절한다. QAE컬럼 또는 다른 적당한 음이온 교환 컬럼을 최소한 2 내지 3컬럼 용적의 적당한 pH 7.5 완충액으로 평형시키고, 수지 1mol당 20mg 이하의 적하량으로 컬럼에 적용시킨다. 컬럼은 컬럼을 평형시킨 동일 완충액에 용해시킨 0 내지 0.5M 범위의 염화나트륨 10 내지 20컬럼 구배의 용적으로 용출시키고, 염을 가하여 전도성을 증가시킴으로써 GM-CSF를 용출시킨다. 분획을 나트륨 도데실 설페이트-폴리아크릴이미드 겔 전기영동상을 기준으로 하여 합하고 농축 및 크로마토그래피를 이용하여 정제한다. |
