| 초록 |
Cas9 단백질의 결실 돌연변이 제조 방법 및 키메라 Cas9 단백질의 제조 방법이 기술된다.Cas9 N- 및 C-말단 도메인은 crRNA/tracrRNA 결합 및/또는 PAM 선택성에서 중요한 역할을 할 수 있다.활성을 분석하기 위하여, NM (네이쎄리아 메닝기티데스 Cas9)의 N 및/또는 C 말단을 ST1으로부터의 상동성 영역으로 대체함으로써, NM 및 ST1 (스트렙토코쿠스 서모필루스 Cas9) 사이의 일련의 도메인 교환 돌연변이들을 제조하였다.다음에는, 가이드 RNA 및/또는 리포터 내 Cas9 특이적 PAM을 변경하는 본원에서 기술되는 전사 리포터 검정을 사용하여 상기 키메라 단백질을 시험함으로써, 단백질 특이성에 대한 도메인 교환의 영향을 확인하였다.NM 및 ST1 사이의 N-말단 도메인 스왑들 중 어느 것도 신규한 특성을 가지는 NM을 제공하지 않았다.C-말단 교환은 ST1 crRNA/tracrRNA 복합체와 상호작용할 수 없으며 또한 ST1 특이적 PAM을 포함하는 리포터를 억제할 수 있는 NM-ST1 혼성체를 생성시켰다. |
