| 초록 |
TALEN은 특정 유전자를 표적하여 녹아웃시킬 수 있는 새로운 개념의 유전자 클로닝이다. TALEN 플라스미드에는 DNA 결합 도메인과 Fok1 절단효소 기능이 융합되어 있기 때문에, 게놈 DNA의 어느 부위라도 결합할 수 있고, 표적 염기서열을 절단하여 유전자 돌연변이를 유도할 수 있다. 본 발명자들은 SETDB1 HMTase 유전자의 단백질 개시코돈과 프로모터 -25 상류 부위를 표적하는 2종의 TALEN 구조물을 제작하였다. 이를 위하여 두 단계의 클로닝을 진행하였다. 첫 번째는 모듈벡터에서 pFUS 배열 벡터로 표적서열을 옮기고, 콜로니 PCR을 통해 얼룩진 밴드와 Esp1 제한 효소를 이용하여 약 1kb의 삽입물이 들어 있음을 확인하였다. 두 번째는 배열 벡터로부터 TALEN 발현벡터로 옮기는 과정을 진행하였으며, 염기서열분석을 통해 확인하였다. 그 결과, 최초의 고안된 모듈벡터 서열들이 약 100 bp 간격으로 배열되어 있음을 확인하였다. 제작된 TALEN-DBEX2 구조물은 트랜스펙션을 통해 SETDB1의 발현이 사라지는 것을 확인하였고, T7E1 분석을 통하여 표적부위에서 돌연변이가 발생하였음을 확인하였다. 한편, TALEN-DBPR25 트랜스펙션을 통해서도 SETDB1 발현이 감소하는 현상을 확인할 수 있었다. |
