| 초록 |
본 발명의 목적은, 한정적인 여러 종의 세균이 아니라, 많은 세균을, 동정용 시약이나 조건을 변경하지 않고 동정 가능한 동정 방법을 제공하는 것. 또한, 1회의 PCR만으로 고감도로 검출·동정하여, 번잡한 조작 및 작업자의 부담을 경감하는 것을 가능하게 하는 동정 방법을 제공하는 것에 있다. 본 발명에 있어서는, 세균의 동정에, 이하의 공정을 갖는 방법을 이용한다.(1) 동정 대상 세균의 동정용 염기 서열을 포함하는 cDNA를 조제하기 위한 역전사용 프라이머, 시료 중의 세균에서 추출된 RNA, 및 RNA 의존형 DNA 폴리머라아제 활성을 갖는 효소를 포함하는 제1 반응계를 이용하여, 역전사 반응을 실시하고, 합성된 cDNA 및 상기 역전사용 프라이머를 포함하는 반응 혼합물을 얻는 공정,(2) 상기 반응 혼합물, 상기 동정 대상 세균의 동정용 염기 서열을 포함하는 2본쇄 DNA를 합성하기 위한 프라이머쌍, 및 DNA 의존형 DNA 폴리머라아제 활성을 갖는 효소를 포함하는 제2 반응계를 이용하여, PCR을 실시하는 공정, 다만, 제2 반응계에 있어서, 상기 반응 혼합물로부터 공급되는 상기 역전사용 프라이머의 농도가 0.08 nM 이상 20 nM 이하이다, 및 (3) PCR 후의 상기 제2 반응계로부터, 상기 동정 대상 세균의 동정용 염기 서열을 포함하는 2본쇄 DNA의 생성을 검출하는 공정. |
