| 초록 |
□ 연구개발 목표 및 내용 ○ 최종 목표 최근 CRISPR/Cas9 시스템의 유전자 재편집 기술이 집중 조명되고 있으나 미생물의 생체방어기작 CRISPR-Cas 시스템의 전사기작 연구는 아주 미흡한 실정임. 본 연구는 감염을 일으키는 항생제내성 세균의 선천면역 시스템인 CRISPR-Cas 전사억제기전을 연구하고, 전사억제인자를 항생제내성 특이적 박테리오파아지에 엔지니어링 기법으로 삽입하여 근본적으로 항생제내성 세균을 제거 하고자 함 ○ 전체 내용 그람음성/양성 항생제내성 균주의 CRISPR-Cas 시스템 유전체 분석 연구 - 반코마이신내성 황색포도알균(VRSA), 반코마이신내 장알균(VRE), 카바페넴분해효소 생산 장내세균(CPE) 등 주요 의료관련감염 원인 항균제 내성세균에 대한 CRISPR 시스템 유무 확인하여 균주 확보 및 배양동정 법정지정 감염 6종을 포함한 항생제내성균주 CRISPR 시스템 전사조절기작 연구 - CRISPR 시스템 존재가 확인된 항생제내성균주로부터 CRISPR 프로모터 부위를 promoterless LacZ 유전자를 가지고 있는 pRS415 벡터에 클로닝 제작 및 활성측정 법정지정 감염 6종을 포함한 항생제내성균주 CRISPR 시스템 전사조절 억제인자 발굴 연구 - 항생제내성균주 CRISPR 시스템 전사조절 억제인자 발현벡터에 클로닝, 단백질 정제 및 항체 제작 항생제내성균주 CRISPR 시스템 발현조절 연구 - 항생제 내성균주 CRISPR 시스템 프로모터의 전사 변화량 측정, 결합부위 및 결합력 측정 - 생화학/분자생물학/나노바이오기술을 이용한 항생제 내성균주 CRISPR 시스템 전사기작 메커니즘 규명 박테리오파아지 엔지리어닝을 통한 항생제내성균주 CRISPR 시스템 억제인자 삽입 제작 - 항생제 내성균주 CRISPR 억제인자를 CRISPR /Cas9 기법을 이용하여 박테리오파아지에 삽입 항생제내성균주 CRISPR 시스템 억제인자가 삽입된 박테리오파아지 활성 및 기능성 연구 - 법정지정 감염 6종을 포함한 항생제내성 균주별로 CRISPR-Cas 시스템 전사억제인자가 엔지니어링된 박테리오파아지의 활성을 검증 □ 연구개발성과 활용계획 및 기대 효과 인체 감염 세균이면서 항생제내성 균주의 생체방어기작에 해당되는 CRISPR-Cas 시스템의 전사조절 기작을 밝히고 더 나아가 항생제내성균주의 제어 연구는 세균의 생체방어기작을 새로운 각도에서 볼 수 있는 기회를 제공할 것임. 또한 세균의 제어 전략에 대한 이해를 높이고 목표 집약적인 연구를 통해 국제적인 항생제내성 병원성 세균 연구의 발전에 공헌함 (출처 : 요약문 2p) |
