| 초록 |
T-세포 내 CTLA-4 결합 파트너인 새로운 단백질 SIT-R의 면역조절 작용기전을 밝힘으로써, CTLA-4의 발현과 기능에 대한 SIT-R의 역할을 규명하고, SIT-R의 활성화에 따른 결합단백질 발굴 및 그 작용기전을 이해하며, SIT-R ligands에 연동되는 단백질군의 기능을 분석하여 4. SIT-R의 의학적 활용방안 및 새로운 면역억제제개발에 대한 기초자료를 제공하고자 하였음. 연구결과를 종합하여 요약하면 (1) SIT-R의 클로닝 및 COS-1 세포에서의 발현을 확인하였고, SIT와 SIT-R 30 kDa 에서 40 kDa 정도의 분자량으로 심하게 글리코실화됨. SIT와 SIT-R 사이에 중요한 차이는 46개의 아미노산의 연장된 N-terminal의 존재하며, 두 N-myristoylation 부위(GLRRDGSKKCC;36-41 residues와 CNRQA; 42-27 residues)있으며, 그리고 125 residue 다음에 부가적인 28개(RWVKDNRDGLTESSFLPRSPHSSPKLCV)의 아미노산이 삽입되어 있음. (2) SIT-R은 CTLA-4와는 강한 결합이 있었음을 알 수 있었음. 그리고 SIT-R과 CD28와는 결합하지 않음을 알 수 있었음. (3) CTLA-4 Y201F과 Y218F 점돌연변이체는 SIT-R과의 결합을 저해하며, ○ Wild type과 비교해서 CTLA4 Y201F는 SIT-R과의 결합력이 50% 저해한 반면, Y218F는 SIT-R과의 결합력을 75% 정도를 저해 하였음. 이러한 결과는 CTLA-4의 세포질내에 있는 타이로신 모티프가 SIT-R에 결합하여 세포내에서 중요한 면역억제 기능이 있음을 시사함. (4) SIT-R (FITC)과 CTLA-4 (Texas Red) 가 세포안 trans golgi network (TGN)에서 co-localize되는 것을 면역형광염색법에 의해 확인하였음. (5) CTLA-4와 SIT-R간의 기능 조절 특성 비교분석해 보면 CTLA-4/SIT-R은 CTLA-4보다 25배 더 낮은 루시페라아제 활성을 보였다. CD28은 CTLA-4보다 4배 더 높은 루시페라아제 활성을 보였음. (6) SIT-R 점돌연변이체 Y164F, Y201F, Y243F과 Y262F에 대한 NFAT 활성을 시험한 결과 WT보다는 현저히 활성이 줄었지만 이들 점돌연변이에 대한 활성이 증가되는 경우가 없음. (7) 세포내 localization과 CD3 자극에 따른 translocation 연구에서 CTLA-4와 SIT-R의 경우 대부분 trans-Golgi network (TGN)에서 co-localize되어 있음을 관찰되었음. (8) Proteomics를 이용한 전체 변화 분석 공동면역침강을 통하여 수종의 단백질 밴드들이 관찰됨을 확인하였음. (9) SIT-R의 새로운 insertion 염기서열에 대한 결합 단백질을 발견하였음. (10)SIT-R은 서로 다른 T-세포 활성(anti-CD3, anti-CD3/CTLA-4와 anti-ctla-4) 에 의해 IL-2 생산을 억제함을 밝혀 SIT-R이 CTLA-4를 매개로 T-세포 활성을 억제함을 알 수 있었음. SIT-R에 의한 SIT-R의 신호전달 억제 능력 및 세포질내 타이로신 모티브 분석하고 확인하였음. (12) SIT-R이 면역침강을 하였을 때 PI3 kinasae의 subunit인 P85와 결합함을 알수 있었음. (13) CTLA-4/SIT-R 복합체에 대한 T-세포에서 신호전달 기전 세포이동 연구에서 낮은 농도의 SDF-1에 의한 화학주성을 가짐. 이러한 SDF-1/CXCR4의 수용체-리간드 상호작용은 항염증작용, 항알러지반응, 면역조절, 항바이러스성 복합체 및 새로운 치료제의 발전에 기여할수 있다고 보고 되었음. 위에 도출된 결과로 인해 새로운 면역억제 항체와 수용체, 리간드, signal 개발을 통한 치료연구에 응용면역억제의 역할을 규명하여 암의 예방·진단·치료에 활용함으로 국가의료보건 향상에 기여암면역학, 세포신호전달학, 유전체학·단백질체학 연구 등에 필요한 우수한 인재양성과 의학 교육에의 활용할 수 있음. |
