| 초록 |
1. 연차목표 - 균주 배양 공정 개발 - 고순도 정제 공정 개발 - 기준 및 시험법에 적합한 공정 확립 - 품질보증 기술 및 제품평가 표준방법 확립 - Sale-up 및 제조 공정 확립 2. 개발내용 및 결과 내용: o 고생산 후보 선도균주의 유전자 조작 기법 확립 및 불순물 최소화 o 고생산 선도 산업균주의 대량생산을 위한 발효 및 정제 공정 개발 o 기준 및 시험법에 적합한 공정, 품질보증 기술 및 제품평가 표준방법 확립 o Sale-up 및 제조 공정 확립 결과: 가. Tacrolimus 생산균주가 생산하는 impurity 제거하여 불순물 최소화 - 경제적 정제공정은 최종 산물의 가격을 결정하는 중요한 요소로 선행연구를 통해 확보된 타크로리무스 생합성 유전자 정보를 이용하여 impurity 생합성 유전자의 핵심 유전자를 선별적으로 제거함으로서 impurity가 제거된 경제적인 고생산 균주를 확보함. 나. Tacrolimus 생산균주의 분리 및 정제조건 최적화 ╶ 선별한 균주를 돌연변이를 통해 개량하여, 배지조건 최적화, 고체배양 및 발효조건 및 정제기법을 확립. 본 배양액이 들어있는 7 liter 실험실규모 발효조에 전배양액을 10%(v/v)되게 식균하여 28℃, 300~500rpm, 1vvm의 조건으로 8~10일 동안 배양하여 최종 생산성 확인함. 다. 배양액으로부터 Tacrolimus의 분리 및 정제조건 최적화 ╶ 배양하여 얻어진 발효 배양액을 극성용매로 추출 및 여과하는 공정; 여액을 1차 정제 수지인 비이온성 흡착수지에 흡착시키고 용리하여 수득하는 공정; 1차 정제 농축액을 비수용성 극성용매로 추출, 농축하여 알칼리화시킨 비극성 용매로 석출하는 공정; 석출물을 용해하여 2차정제수지인 플래시 컬럼에 흡착시키고, 은염이 포함된 수용성 용매로 용리하여 농축하는 공정; 2차 정제농축액을 비수용성 극성용매로 추출 및 농축하고, 탈색 및 은염을 제거하기 위하여 활성탄을 사용하는 공정; 및 극성용매로 결정화하는 공정으로 이루어짐. 3. 기대효과(기술적 및 경제적 효과) - 점차 증대되고 있는 면역억제제 수요에 대비하여 수출증대 효과 기대됨 - 균주 개량방법, 개량에 사용된 vector, 그리고 확보한 유전자는 향후 미생물 균주의 산업화에 사용될 수 있는 주요 infra가 될 것임 4. 적용분야 - 아토피 피부염에 탁월한 효능, 부장용 없음으로 장기간 복용 시 유발하는 스테로이드계 약제를 대체할 것으로 예상 - 탁월한 면역억제 효능으로 장기이식 후 유발되는 거부반응을 억제 할 수 있는 면역억제제로써도 주목을 받고 있음 (출처 : 연차보고서 초록 3p) |
