| 초록 |
□ 연구개요 ● 실험동물을 통한 염산(HCl)과 수산화나트륨(NaOH)에 의해 유도된 LMG의 면역능 및 병원성 균주 challenge에 대한 숙주 방어효과 비교 ● HCl과 NaOH의 MIC 조건에서 제조된 LMG의 표면단백질체 비교 ● 동정된 주요 면역단백질 유전자를 대장균내 발현 및 재조합단백질 생산한 후 이를 항원으로 1차년에서 획득한 항체를 이용하여 항원-항체 반응 검증 □ 연구 목표대비 연구결과 ① 1차년도 ● HCl-유도 LMG와 NaOH-유도 LMG 간에 체액성(humoral) 및 세포매개성(cell-mediated) 면역 반응 비교 ● HCl-유도 LMG와 NaOH-유도 LMG를 면역접종한 마우스로부터 획득한 항혈청과 반응하는 L. monocytogenes 외막단백질 탐색 ● HCl-유도 LMG와 NaOH-유도 LMG를 면역접종한 마우스로부터 획득한 항혈청의 항세균 활성 비교 ● In vivo 사이토카인 분석 및 비교 ● HCl-유도 LMG와 NaOH-유도 LMG를 면역접종한 마우스의 보호능 비교 ● 생존률 조사 ② 2차년도 ● 주사현미경(Scanning Electron Microscope; SEM) 관찰 ● 2-DE immunoblotting과 mass spectrometry를 이용한 LMG 표면단백질 중 면역원성 단백질을 동정하고 특성을 규명함 ③ 3차년도 ● 표적유전자 flaA 합성, pET-28a 벡터 클로닝 및 벡터 내 도입 여부 검증 ● 재조합단백질 flagellin 발현 및 분리정제 ● 재조합단백질 flagellin 면역접종(vaccination) 및 L. monocytogenes 공격접종(challenge) ● FACS 분석, Indirect ELISA 분석 및 항혈청의 살균 활성(serum bactericidal activity) □ 연구개발성과의 활용 계획 및 기대효과(연구개발결과의 중요성) ① 활용계획 ● 감염성세균을 제어할 수 있는 새로운 파라다임의 다가백신 개발 플랫폼으로 활용 ● 사업화 지원과제를 통해서 비임상시험 혹은 임상1상시험 수행함과 동시에 백신개발사로 조기 기술이전 도모 ● BG 플랫폼 기반의 백신벡터 개발은 항암, 항염증 및 항당뇨 관련 유전자 혹은 약물을 전달할 수 있는 시스템으로 활용할 수 있음 ② 기대효과 ● 백신 및 면역기전 연구에 새로운 tool을 제공할 것으로 기대됨 ● 리스테리아증 예방용 생균백신의 단점을 극복하고 기존백신의 성능과 비교하여 효능과 안전성에서 우월할 것으로 기대됨 ③ 연구개발결과의 중요성 ● 본 연구의 핵심 기술은 그람양성균인 Listeria monocytogenes 세포벽에 영향을 미치는 NaOH 혹은 HCl의 MIC에 기반을 둔 LMG를 제조하여 이를 백신으로 활용하는 신개념의 방법임 ● 이렇게 화학적으로 유도된 LMG는 세포 내부는 텅 빈 상태이지만 외막의 형태를 완전하게 유지하는구조체이기 때문에 항원결정부위를 완전하게 보유할 수 있고 기능적으로 생백신과 유사한 효과를 나타낼 수 있고, 외래적인 보조제를 첨가하지 않고도 내재면역과 적응면역 시스템을 쉽게 자극시킬 수 있음 ● L. monocytogenes 박테리아에 주어진 산 혹은 알칼리 스트레스에 대한 단백질체 분석을 통해 세포외피 단백질의 변화(증가 및 감소)를 관찰할 수 있으며, 관련 대사과정을 이해할 수 있음 (출처 : 연구결과 요약문 2p) |
