| 초록 |
본 연구개발사업의 목적: ▪ 항체 Fc공학 플랫폼 기술을 이용하여 활성화 FcγRIIIa에 높은 친화도를 보이는 무당화 항체 Fc 변이체들을 발굴 ▪ 무당화 항체 Fc 변이체를 이용한 암세포 사멸 효과를 유도 ▪ 당화 비균질성 문제가 없고 박테리아에서도 생산이 가능한 무당화 치료용 항체 개발 연구방법: ▪ 활성화 FcγRIIIa에 높은 친화도를 보이과 면역세포 활성화가 가능한 치료용 항체로 방향적 진화 (directed evolution)시키기 위해 거대 Fc 변이체 라이브러리를 구축하였음. ▪ Fc 변이체 탐색, FcγR 결합력 분석, pH-의존 FcRn 결합력 분석을 위해 Fc 수용체들(FcγRI, FcγRIIa, FcγRIIab, FcγRIIIa, FcRn)을 발현 및 정제하였음. ▪ 유세포 분리기 (flow cytometry)를 이용한 고속 탐색을 위해 정제된 FcγRIIIa를 형광 표지화 하였음. ▪ 구축된 거대 Fc 변이체 라이브러리를 항체 Fc 변이체 디스플레이 시스템과 유세포 분석기(flow cytometry)를 활용하여 고속 탐색하였음. ▪ FcγR (FcγRI, FcγRIIa, FcγRIIb, FcγRIIIa)과 FcRn 결합력 및 특이성을 ELISA 및 SPR방법으로 분석하였음. ▪ PBMCs (Pheripheral blood mononuclear cells)를 작용세포로 하는 ADCC (antibody dependent cell-mediated cytotoxicity) 분석을 통하여 항체 Fc 변이체의 암세포 사멸 효능을 검증하였음. 연구결과: ▪ IgG 항체 Fc 변이체 탐색과 분석에 이용할 Fc 수용체들 (FcγRIIa, FcγRIIb, FcγRIIIa,FcRn)이 동물세포에서 성공적으로 발현 및 정제되었고, FcγRIIIa를 형광 분자로 표지화 한후 활성 확인을 완료하였음. ▪ 향상된 FcγRIIIa 결합을 위해 Fc거대 라이브러리 Fc 변이체 라이브러리 (라이브러리 크기 >109)가 성공적으로 구축되었으며, 박테리아 디스플레이와 유세포 분리기를 이용한 고속탐색으로 FcγRIIIa에 대한 결합력이 월등히 증가된 무당화 항체 Fc 변이체를 선별하였음. ▪ 선별된 무당화 항체 Fc 변이체를 포함한 trastuzumab은 glycosylation이 없어도 당화 야생형 trastuzumab이나 임상에 사용 중인 clinical grade Herceptin에 비해 FcγRIIIa에 대한 결합력이 높은 것을 확인하였음. ▪ 발굴된 Fc 변이체를 포함한 trastuzumab 항체는 다양한 FcγRs (FcγRIIa, FcγRIIb, FcγRIIIa)에 결합을 하였고, 우수한 pH-의존 FcRn 결합력을 보이는 것을 확인하였음. ▪ PBMCs를 이용한 ADCC 분석을 통해 발굴된 무당화 항체 Fc 변이체의 암세포 사멸 효능 검증하였으며, 발굴된 무당화 trastuzumab Fc 변이체는 glycosylation이 없어도 강력한 PBMCs에 의한 ADCC 작용기작을 유도할 수 있음을 확인하였음. ( 출처 : 요약문 4p ) |
