| 초록 |
연구개발 목표 및 내용 최종 목표 O 소나무재선충병 바이오마커 Bx-Prx를 생산 후 이를 항원으로 이용하여 항체를 생산하고 염기배열을 확보함. O 염기배열을 바탕으로 재조합 항체 발현유전자를 구축하고, 대장균을 이용하여 재조합 항체를 작성한 후 형광을 부착하여 소나무재선충을 간편, 신속, 정확히 진단 가능한 형광항체를 개발함. 전체 내용 O 재조합 단백질 Bx-Prx를 대장균 발현시스템에서 고순도, 고수율로 대량생산 함. O Phage display법을 이용하여 Bx-Prx 인식 항체의 라이브러리를 구축하고, Biopanning을 통해 항원결합성이 강한 항체를 선별함. O 항체의 cDNA를 추출하여 가변영역의 염기배열을 동정하고, 재조합 항체 발현벡터에 클로닝 하여 항체발현 플라스미드를 구축함. O 재조합 항체를 대장균 발현 시스템에서 대량생산하고, ELISA를 수행하여 재조합 항체의 항원 결합성을 평가함. O 항체에 형광색소를 부위특이적으로 부착하여 형광항체를 제작하고, 항원 농도가 증가함에 따라 형광 강도가 증가하는 양상을 형광스펙트럼측정기로 측정하여, 항원 검출 검량선을 작성함. 연구개발성과 O 소나무재선충병의 바이오마커인 Bx-Trx를 고수율, 고순도로 대량생산하였음. O Bx-Prx에 특이적으로 결합하는 monoclonal antibody를 확보하였음. O 확보한 항체의 염기서열을 동정하여 재조합 항체를 생산함으로써 매번 phage display를 수행하지 않고도 동일한 batch의 항체를 대량 생산 가능하도록 하였음. O 대장균을 이용하여 재조합 항체를 저가로 생산하고, 형광색소를 부착하여 형광항체化하였음. O 항원농도 의존적인 검량선을 확보하여 소나무재선충 검출에 사용될 수 있음을 제시하였음. 연구개발성과 활용계획 및 기대 효과 O 본 연구에서 개발한 형광항체를 탑재한 휴대용 측정기를 개발함으로써 비전문가도 현장에서 시료를 채취하여 즉시 감염 여부를 판단하여 확산을 조기에 방지할 수 있는 획기적인 소나무재선충병 진단 기술로 활용될 수 있음이 기대됨. O 수분 이내에 현장에서 빠른 진단이 가능하기 때문에 시료 운송 비용 및 벌채 비용을 절감할 수 있으며, 소나무재선충병의 조기진단을 통한 효율적 방제로 인하여 국내외 검역 경쟁력을 강화하고 산림환경을 보호하는데 기여할 수 있음. (출처 : 요약문 2p) |
